荧光范围变小原因：

1、中灰滤色片没有完全到位。这个时候看到的会是一部分亮一部分不亮，亮的部分和不亮的部分大抵是一个圆弧的界限。  

2、光阑关小了。这个时候看到的应该是中间亮边缘暗或者没有荧光了；如果伴随光阑中心不正，那就不是中间亮了，可能是某一块地方亮；这个时候看到的亮的部分大抵是一个正多边形。  

3、汞灯中心不正。可能是更换新灯泡之后没有调节好中心或者是好奇的人动了灯箱上的调节杆，这个时候看到的部分亮的形状就不好形容了，各种情况都可能有，但是基本不会和1、2的形状雷同，前2者基本可以看到比较规则清晰地界限，这种情况下基本看不到规则的清晰地界限。  

4、激发块转盘没有转到位或者分光棱镜没有拉到位。这种可能性比较小，产生的图像偏差和情况1类似。

40倍物镜看不清楚原因：    

倒置荧光显微镜很少配置油镜，所以沾上油的几率很小，不过不排除培养器皿中液体滴到镜头上造成污染，可以先做一下清洁。有一个比较常见的情况：40X的物镜大多数情况会带有校正环（只要是好点的的物镜），可以在40X下先调节到最接近清楚地焦平面，然后调节物镜上的校正环，基本可以解决看不清楚地问题。