| 尼康显微镜的光学原理和构造 细胞分类的原理是通过形成含有细胞的带电小水滴实现的，喷嘴上的奥林巴斯显微镜的频率振荡，尼康显微镜射束破碎成4万个均匀的小水滴，通过喷嘴后流动的细胞就被分散在这些小水滴中。由于小水滴是在荧光和散射光测量之后形成的，当某一个细胞的荧光和散射光信号被处理(比较)，延迟和联合以后产生一个充电脉冲信号，当这个被测量过的细胞刚要形成小水滴时，充电脉冲信号通过喷嘴对整个流束充电，这样刚形成的含有细胞的小水滴就带上了电荷，当充电的小水滴通过一对带有恒定静电场的偏转板时，带电的小水滴根据自身所带的电荷性质发生偏移，至于小水滴被充正电还是负电，则是根据被测定细胞的荧光和散射光信号与预先选定的标准(脉冲高度)进行比较来决定。对于分类无意义的不含有细胞的小水滴，不需要的细胞和细胞碎片以及与预定值相当接近很难准确分类的细胞不进行充电。在静电场作用下，带正电荷的水滴落入左方细胞收集器，而带负电荷的水滴落入右方收集器，不带电荷的落入中间容器。 荧光和散射光的信号输入到多道脉冲高度分析器进行分析，分析的结果可用示波器和X-Y记录仪按组方图形式表示，或通过数字打印机打印出每道的细胞数，或通过穿孔机做成穿孔纸带以便进入计算机进一步分析，或者可以与计算机联机操作直接把结果输入到计算机。 细胞制备技术看来是成功地使用流式细胞光度计的关键，在固定染色和测量过程中一定要保证细胞处于单个零散状态，而不能使细胞成团，并尽量减少处理过程中细胞的丢失。 ①测定细胞周期各时相细胞的比例。通过测定细胞群体中每个细胞的DNA含量，得出DNA含量分布的组方图(图16.8)。图中第一个DNA频率分布峰是含有2C DNA含量的Gi/Go(DNA合成前期/静止期)峰，含有4C DNA含量的为G2+M(DNA合成后期+有丝分裂期)峰，2C到4C DNA含量为S期(DNA合成期)的区域。用绘图法或Zui小平方弥合法，徕卡显微镜可计算各时期内的细胞占细胞群体的百分数。电离辐射和化疗药物通常对于数码显微镜发生于扰作用，瘤临床有密切关系。 |
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