做定量PCR 阴性对照一直都存在
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来源:转载网络 作者： zhangxf2014
刚开始做定量PCR，用的SYBR染料法，阴性对照（只加水）总是有扩增，Ct值都在35以下。之后换实验室、换水、换枪，引物重新合成，试剂也是新开的，但是还是存在阴性扩增，电泳检测，NTC条带和目的基因的一致。现在用UDG试剂做的，问题仍然无法解决，实在想不通是什么原因？实验室有个老师半个月就把定量做完了，我这都做了2个月了。求大神赐教啊！！！
想什么有什么 加油
先不做定量，不加引物试试
就是普通的PCR，做实验组，不加模板，不加模板和引物，
我曾经也受pcr污染的苦恼，后来p该基因的时候只能去另外一个实验室做，之前尝试过各种办法，包括移液器拆卸高压等均无果
请问你之后解决没有？
就是普通的PCR，做实验组，不加模板，不加模板和引物，
不加模板和引物是什么意思呀？我们只做过不加模板的。不加引物应该没有东西吧
不试试怎么知道
还有就是只加模板不加引物。找问题嘛，谁知道是什么原因。
好的，之后上图
请问你之后解决没有？
该基因在我博士期间一直困扰，因为我之前做了这个基因的表达还有报告载体，污染很难消除
...
换场所试试
楼主，你这应该是环境污染了！阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上，如果你的阴性对照35，目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风，或实验室消毒，或换个环境做。
换场所试试
换过几个不同的实验室，都没有用
楼主，你这应该是环境污染了！阴性对照ct值大于你的基因ct值5个ct以上，如果你的阴性对照35，目的基因30以内结果还是可信的。或者你可以实验室通风，或实验室消毒，或换个环境做。
不爱做实验
1、引物换个位置重新设计
2、可以考虑用灭菌水，换个机器来取水
3、Zui好换到很少有人做实验的房间
1.引物有重新设计，但是效果不理想。
2.我们用的三蒸水都是灭菌之后才用，应该不会污染吧，也用过其他实验室的无菌水做过。
3.我们换过，还是不行。实在想不出是哪里出问题？
2.我们用的三蒸水都是灭菌之后才用，应该不会污染吧，也用过其他实验室的无菌水做过。
3.我们换过，还是不行。实在想不出是哪里出问题？