显微镜相差怎么对准？

 2016-03-24     技术支持

相衬显微镜的仔细比对是必要的，以便产生Zui大的反差效果，而不会引入降解标本外观或导致错误的解读文物。 这种互动式教学探讨变化的时候，聚光镜环被移入和移出对准相位板的物镜是通过目镜（在不同的放大倍数）怎么标本出现。

本教程初始化与标本出现在显微图像窗口上的教程的右侧随机选择的相衬。 邻近该窗口是物镜后侧焦点面的图（题为物镜后侧焦平面 ;在左侧）示出了物镜相位板和聚光镜的环形带的附近。 默认情况下，物镜相位板和聚光镜环光锥是不对齐的，必须使用X-翻译和y平移滑块被重新定位。 将这些滑动件使操作者能够调节聚光镜环形光锥的位置相对于所述固定物镜相板。当两个环体被集中时，获得Zui大可能的标本对比度。

作为替代平移滑块，鼠标光标可用于在窗口内拖动聚光镜环形图像，以便它可以在物镜相位板的周边之内的任何位置。 新的标本可以被加载到本教程通过使用选择A试片下拉菜单，物镜放大倍数可以通过选择物镜菜单中更改。 一个新的标本或物镜选择每一次，教程会自动重新加载的随机偏差聚光镜环和物镜相环。

而使用伯特兰透镜或相位望远镜观看的物镜的固定相环时，操作者可以再执行调整到聚光镜环形位置来对齐两个用于相衬观察（参见图1）。 示于图1是物镜的后侧焦点面上的未对准的图像（图1（a）和图1（c））和后聚光镜纤维环和相位环已被正确地对准（图1（e））。 也示于该图中是通过目镜（图1（b），1（d）和1（F）），这表明，当在显微镜未对准试样的显示方式（图1（观看时，出现在相应的图像b）和图1（d）），并仔细对齐（图1（F））按照下面列出的步骤。

在试图使一个显微镜相衬观察，检查仪器仔细，以确保所有物镜包含相位板，并牢固地安装在物镜转换器。 物镜还应该顺序地排列在其上排列的物镜转换器，从低到高的放大倍率，以便Zui大限度地减少1聚光镜的环形带和另一个之间切换的频率。 通常情况下，10倍和20倍的物镜，有着共同的聚光镜环，因为这样做的40倍和60倍的物镜。 高度校正物镜，如专为油浸apochromats，往往有相似的数值孔径，并使用相同的聚光镜环在更宽的范围内放大倍率（40倍到100倍）。 低倍率相位对比（4倍和5倍），通常需要一个摆动镜头聚光镜和聚光镜专用环。

聚光镜环形板也应顺序排列，从设计用于低倍率物镜的环形空间，并继续直至1设计的Zui高放大倍数。 在一般情况下，在整个放大率范围可覆盖三个或四个独立的环。 如果一个普遍的聚光镜采用，定位Zui低的放大倍率环（例如，PHL或PH1）到明槽的右边，而其他板块在周边槽顺序。 通常，试样必须检查在之前或之后相衬观察明场，所以这种布置将提供一个容易的工作流程。

被推荐为相衬显微镜的对准下面的步骤。

• 放置一个明亮的染色标本在载物台上旋转10X相衬物镜成明照明模式下的光学通路。聚焦样本，并关闭该视场光阑，直到它进入视场的边缘。 用聚光镜高度调节旋钮，定位台下聚光所以各树叶的视场光阑的是在清晰聚焦，并利用主聚光镜定心调整旋钮，以确保视场光阑的中心在视场中。 请仔细检查显微镜配置，以确保科勒照明已经实现，并且标本是在大家关注的焦点。

• 取出染色标本，并放置一个阶段标本在显微镜载物台上。 在情况下，物镜试样仅具有Zui小的光程差（和可能难以显现），配合已知能产生高对比度的相衬模式标本的显微镜。 转动聚光器转盘直到适当的环形定位在光路径（ 的Ph1或等效为10x物镜）。 检查以确保聚光镜环颜色代码或题词相匹配的物镜。 检查聚光镜孔径光阑调节杆的位置，并将其移动到Zui宽光圈位置（专为相衬聚光镜可自动执行此操作）。

• 如果显微镜配备一个伯特兰透镜，使用指轮控制的透镜摆动到位。 另外，取出显微镜目镜中的一个，并插入一个阶段望远镜进入观察筒。

• 同时通过目镜或相位望远镜窥视，调整勃氏镜或望远镜聚焦眼球管的焦点，直到在物镜相板是大家关注的焦点，和聚光镜环和黑暗的中性密度材料的明亮的图像之间的重叠相位板是显而易见的。 在许多情况下，在显微镜Zui初将不对准和纤维环的图像将不能准确地叠加在中性密度材料中的相位板（如图1（a）和图1（c））。

• 定位在聚光镜环形定心销（或螺钉）与调节环的位置用一对螺丝起子或适当的旋钮，直到它是一致的物镜标相位板（图1（e））。 注意：不要试图调整聚光镜环的位置与主聚光镜定心旋钮（通常位于连接到显微镜聚光镜安装支架）。 这方面的努力可能不会达到预期的聚光镜环对准肯定会危及先前应该已经建立了科勒照明条件。

• 当聚光镜纤维环在正确的位置时，光通过该环通过聚光镜将被施加到物镜相位板，降低了环形图像的强度的中性密度材料被衰减。 因此，如果聚光器环形不当居中，明亮的月牙边会出现相邻的物镜相位板的中性密度材料（图1（a）和图1（c））。如果环的形象不相板的黑圆内放不下，那么无论是聚光镜失焦（和科勒照明是不成立的），或相望远镜（或伯特兰镜头）不集中的物镜后侧焦点面。 在某些情况下，甚至当相望远镜（或伯特兰镜头）和台下聚光正确聚焦，聚光环图像模糊，并出现失焦。 这可以通过从检体低频衍射引起的。 如果发生这种情况，从载物台上移除标本，并进行显微镜对准。

• 如果聚光镜环形图像是显著不同的尺寸从该物镜相位板，检查是否错环形板已被安装在所述聚光镜（Zui可能的原因）。 另一种可能性，如果高数值孔径的油浸物镜被采用，是在聚光镜前透镜元件被设计为浸入。 在这种情况下，它可能是困难的（或不可能）叠加在相位板聚光镜环形无油的聚光透镜和所述显微镜载玻片（和/或所述物镜和盖玻片之间）之间的压降。

• 当聚光镜环和物镜相板在适当的调整，在图1（e）所示的图像应该出现在阶段望远镜目镜或用勃氏镜到位。 在这一点上，在显微镜的配置是否正确观察相衬照明试样。

• 用目镜代替阶段望远镜，或旋转伯特兰透镜出光路径，并检查标本。 背景应该出现在色的中性灰色（取决于物镜相位板的中性密度）与在高对比度可见的试样。

一旦显微镜已经对准相位相反，它通常会保持其中心定位为相当数量的物镜/年轮的变化，但应定期检查，以确保正确对齐。 如果在显微镜开始偏离了对齐，出现在目镜（或在计算机显示器上）的图像将出现越来越多像那些明照明观察。